ПЛР аналіз - що це таке: як і де здати

Тим, хто цікавиться новими способами діагностики, слід дізнатися, що таке метод ПЛР. Сучасні технічні можливості в галузі лабораторних досліджень надають можливість виявляти безліч захворювань на початкових стадіях. Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) вважається на даний момент самим точним і новим методом.

Аналіз методом ПЛР

ПЛР аналіз - що це таке? Це метод використовує принципи молекулярної біології. Для дослідження матеріалу застосовуються особливі ферменти, які багаторазово і швидко копіюють ДНК, РНК фрагменти збудників хвороби. Існує різні види ПЛР аналізу в залежності від досліджуваного матеріалу (кров, сеча, кал і т. д.). Після обробки співробітники лабораторії порівнюють з базою даних отриманий результат, виявляють концентрацію, тип збудника.

Аналіз ПЛР поміщають в спеціальний ампліфікатор (прилад), який нагріває і охолоджує пробірки з біоматеріалом. Зміни температури потрібні для реплікації фрагментів. Точність результату буде залежати від точності температурного режиму. Метод полімеразної ланцюгової реакції допомагає виявити:

• інфекційний мононуклеоз;
• ВІЛ;
• цитомегаловирусную інфекцію;
• вірусні гепатити G, C, B, A;
• інфекції/захворювання, що передаються статевим шляхом (ІПСШ/ЗПСШ): гарднерельоз, трихомоніаз, уреаплазмоз;
• герпетичну інфекцію;
• онкогенні віруси;
• лістеріоз;
• хелікобактерну інфекцію;
• кліщовий енцефаліт, бореліоз;
• туберкульоз;
• кандидоз.

Крові

На даний момент з-за новизни технології аналіз крові методом ПЛР все ще має високу ціну. Для підготовки біоматеріалу не потрібно дотримуватися певні вимоги. Навіть викликані фізичними навантаженнями, стресами, зміною раціону харчування зміни складу не впливають на результат дослідження. ПЛР аналіз крові може зіпсувати тільки прийом антибактеріальних засобів, тому перед здачею необхідно витримати паузу між лікуванням і тестом.

ПЛР дослідження крові – найпоширеніший варіант діагностики хронічних, гострих інфекційних патологій при вірусному або атиповому прояві. Серологічні методи дослідження мають певну трудність при проведенні – визначення наявності збудника проводиться за наявності антитіл в організмі людини. Результат міг бути хибнонегативних, якщо стан хворого не давало час для їх вироблення.

Мазка

В сфері гінекології для дослідження наявності інфекційних мікроорганізмів використовують ПЛР аналіз мазка. Робота з матеріалом проводиться за тим же принципом, що і з кров'ю: багаторазове збільшення фрагментів ДНК збудника, щоб з легкістю його ідентифікувати. Це допомагає виявити приховані інфекції у жінки. Для проведення аналізу можуть бути взяті різні біологічні рідини: слина, мокротиння, сеча, кров. У гінекології для точності визначення частіше використовується мазок зі слизової оболонки піхви, з цервікального каналу.

Для проведення ПЛР існують певні показання. Нерідко його потрібно зробити, щоб виявити стійкий до антибіотиків вид збудника. У жінок основними показаннями для діагностики цього методу виступають:

• вагітність, що протікає важко;
• гостра фаза ІПСШ;
• якщо є підозра на перехід ІПСШ в хронічну стадію;
• пошук причин безпліддя.

Калу

Для виявлення інфекції може бути призначений з боку лікаря аналіз калу на ПЛР. Для того, щоб отримати максимально достовірні результати після тесту, необхідно дотримуватися наступних правил перед парканом біоматеріалу:

• за кілька діб припинити прийом проносних препаратів: масла, свічки;
• виключити медикаменти, які дають специфічну забарвлення калу, приміром, із вмістом заліза.

Для забору слід використовувати стерильну паличку і контейнер. Чим їх додатково протирати, споліскувати не треба. При зборі матеріалу будьте обережні, ви не повинні зачепити рукою внутрішні стінки контейнера. Слідкуйте, щоб в калі не було домішок сечі, можна використовувати додаткові допоміжні засоби для випорожнення (клізма). Збирати матеріал потрібно в день здачі, вистачить 1/3 об'єму контейнера. Даний метод діагностики має наступні переваги:

1. Аналіз здатний вказувати на ДНК паразита, інші ж тести можуть визначати тільки залишки їх життєдіяльності.
2. Висока точність, буде встановлено збудник.
3. Ультрачутливий аналіз, який здатний виявити навіть одну клітку вірусу.
4. Результат дослідження ПЛР буде готовий через 4-5 годин.

Сечі

При необхідності для проведення тесту лікар може взяти для дослідження сечу. Висока точність відкриває можливість працювати з будь-якою біологічною рідиною, з якої вдається витягти ДНК вірусу. Щоб здати аналіз сечі ПЛР, потрібно дотримуватися таких обмежень перед забором матеріалу:

• мінімум за 1 день до процедури припинити статеві контакти;
• за 3 тижні до здачі повинно бути закінчено будь антибактеріальне лікування, тому що медикаменти змажуть картину;
• здавати аналіз потрібно натщесерце (рідина теж заборонена);
• брати треба першу ранкову порцію матеріалу.

Результати аналізів ПЛР

З вищезазначеного зрозуміло, що таке ПЛР аналіз і видно явні переваги такого методу дослідження. Ще один плюс даної діагностичної процедури – простота розшифровки результатів. Враховуючи, скільки робиться аналіз ПЛР (сам процес займає близько 5 годин, але лабораторія видає дані через 1-2 доби), даний метод діагностики стає кращим варіантом для визначення безлічі інфекцій. За результатами лікар може сказати вам, що тест:

1. Негативний – у досліджуваному матеріалі не було шуканого збудника.
2. Позитивний – були знайдені РНК, ДНК збудника.

Іноді проводиться кількісне визначення мікроорганізмів. Це необхідно при захворюваннях, які викликають умовно-патогенні збудники. Особливість цих вірусів у тому, що вони проявляються тільки при надмірній кількості і знайти їх звичайними дослідженнями вкрай проблематично. Цей фактор важливий для вибору терапевтичної тактики, щоб ефективно лікувати вірусні інфекції, наприклад, гепатит, ВІЛ.

На 12 інфекцій

Щоб зрозуміти до кінця, що таке ПЛР діагностика інфекцій і наскільки вона ефективна, потрібно дізнатися, що вона здатна виділяти до 12 збудників. Проводиться текст тільки в лабораторних умовах. Для дослідження застосовують спеціальні ферменти, які у багато разів збільшують кількість РНК, ДНК фрагментів вірусу. Аналіз ПЦР на 12 інфекцій здатний виявити:

• мікобактерії туберкульозу;
• ВІЛ;
• цитомегаловірус;
• гепатит C, G, B, A;
• герпес 1, 2 типу;
• вірус Епштейн-Барра (інфекційний мононуклеоз);
• інфекції, які передаються полови шляхом, наприклад, хламідії;
• лістеріоз;
• ВПЛ;
• кандидозную інфекцію;
• хелікобактер пілорі;
• бореліоз, кліщовий енцефаліт.

На гепатит С

Цей діагностичний метод допомагає визначити наявність вірусу в крові. Це дає лікарям можливість говорити про його наявність або відсутність. Аналіз ПЦР на гепатит С буває двох видів: якісний і кількісний. Перший варіант вказує лише на його наявність і може мати формулювання «виявлений»/«не виявлено». Цей вид тесту має чутливо у 10-500 МО/мл Це говорить про те, що при низькому вмісті збудника в організмі аналіз буде «не виявлено».

Кількісний аналіз більш точний і покаже концентрацію інфекції в крові. Позначається цей показник як «вірусне навантаження», виміряється в кількості вірусної РНК на конкретний обсяг крові. Розшифровка в різних лабораторіях, може відрізнятись. Крім вимірювання в МО/мл використовуються одиниці виміру «копії». Перерахувати копії на МО можна за формулою: 1 МЕ = 4 копії. Якщо у розшифровці значення присутність вірусу перевищує 800 000 МО/мл (або 800*103), це говорить про високий вміст збудника.

На туберкульоз

Робити тест слід в ранковий час. Це важливо для того, щоб не дати всьому масиву мокротиння, який утворився за ніч, вийти з шлунка. Аналіз ПЦР на туберкульоз так само важливий як ІФА, Манту, томографі. Тест допомагає виділити наявність мікобактерій, стан сечі, загальний імуноглобулін, ШОЕ, визначити стан легенів на даний момент. Для точності отримання результатів при аналізі ПЛР необхідно проводити з дотриманням таких правил:

1. Здійснюється посів 3 рази, але повну аспірацію вмісту шлунка слід проводити тільки в умовах стаціонару.
2. Виявляє мікобактерії посів наявних мас в шлунку менш ніж у 50% діагнозів. Навіть при отриманні оптимальних умов рекомендується замість них УЗД.
3. Навіть при негативному характері результату не може бути повністю виключена ймовірність розвитку туберкульозу із зміною ШОЕ, імуноглобуліну або інших показників.
4. Посів матеріалів при ПЛР менш сприйнятливий на патологічні стану, якщо він отриманий у рамках бронхоскопіческой обстеження, який відкидає підозри на ТБ у дитини.

На ВІЛ

Для багатьох людей цей діагноз вважається смертельним вироком. За цієї причини після частих статевих зв'язків людина стає більш уважним до сигналів, які подає його тіло (а іноді придумує їх). Найнадійніший варіант отримати підтвердження або спростування даного захворювання – ПЛР аналіз на ВІЛ. Тест можна використовувати для визначення наступних можливих проблем зі здоров'ям:

1. Спростування/підтвердження наявності ВІЛ у період серонегативного кона.
2. Визначення генотипу ВІЛ-1, ВІЛ-2.
3. Уточнення опису патологічного процесу при сумнівному результаті імуноблоту.
4. Зараження після переливання крові.
5. Визначення ВІЛ-статусу у дітей, які народилися від матерів-носіїв захворювання.
6. Допомагає встановити спостереження за вірусної завантаженістю організму.

На ВПЛ

Вірус папіломи може бути виявлений у будь-якої людини, довгий час він може перебувати в латентному стані. Розвиток провокує ослаблення імунітет, стреси або емоційні сплески. Аналіз ПЦР на ВПЛ допомагає визначити концентрацію вірусу в крові. З цієї причини рекомендується проводити визначення кількісно, а не якісне. Ці дані допоможуть спрогнозувати імовірність розвитку злоякісного характеру інфекції.

Методика діагностики наявності ВПЛ ґрунтується на основному властивості ПЛР виділяти з матеріалу ДНК вірусу. З-за високої чутливості тесту навіть невелика кількість бактерій буде виявлено. Кількісне дослідження відкриває лікарям можливість встановити ступінь небезпеки захворювання, скласти прогноз на майбутнє. Ця діагностика обов'язкова для всіх чоловіків і жінок, які виявили у себе кондиломи. Кількісний аналіз ПЛР допоможе визначити, що послужило причиною розвитку ВПЛ: тимчасове зниження імунітету або хронічне захворювання.

На герпес

Даний вид діагностики в мікробіології допомагає з високою точністю проводити аналіз ПЦР на герпес. Копіювання фрагментів ДНК вірусу буде відбуватися тільки, якщо в матеріалі присутній потрібний ген. В даному випадку тест з результатами проведення може вказати на наявність чи відсутність збудника. Виявити його вдасться навіть при низькій концентрації в крові.

Ще один плюс аналізу ПЛР в тому, що він може визначити герпетичну вірусну інфекцію відразу ж після зараження, до появи клінічної симптоматики. Можна визначити тип герпесу (1 або 2), для здачі аналізу специфічної підготовки не потрібно, але лікарі рекомендують перед забором крові відмовитися від:

• смаженого;
• гострого;
• алкоголю;
• жирного.

При вагітності

При виношуванні дитини дуже важливо провести дане дослідження, щоб поставити на облік стан жінки. ПЛР аналіз при вагітності входить в перелік найбільш ефективних методів визначення наявності різноманітних захворювань. Провести тест потрібно не тільки для виявлення патологій, але і для визначення ймовірності зараження дитини внутрішньоутробно. Тільки завдяки ПЛР-діагностики стало можливим виявити ступінь прогресування, розвиток безлічі інфекцій всередині утроби матері.

Здача аналізів ПЛР

Якщо вам цікаво, як беруть аналіз ПЛР, то слід розглядати кожен окремий випадок, враховуючи тип біоматеріалу. Зішкріб, мазок або забір крові має свої особливості, наприклад:

• плазма здається вранці;
• сеча береться тільки перша вранці, в лабораторних умовах у стерильний контейнер;
• мазок або зішкріб буде показовий тільки після утримання від статевих контактів не менше 3 діб;
• не можна здавати мазок під час менструації і через 2 доби після неї.

Де здати аналізи на ПЛР

Даний вид дослідження відноситься до сучасним і високотехнологічним способів діагностики. Здавати аналізи методом ПЛР слід в лабораторіях, які володіють всім необхідним комплексом для отримання повноцінних результатів. Не меншу роль відіграють кваліфіковані, підготовлені кадри. Віддайте перевагу великими, серйозним, відомим лабораторіям. Це допоможе не тільки отримати результати швидко, але і забезпечить їх достовірність.

Ціна

Ще одне питання, яке часто цікавить пацієнтів: скільки коштує аналіз ПЛР? З-за новизни методу, необхідність придбання дорогого устаткування ціна на тест відносно висока. На вартість ПЛР впливає вид інфекції, на яку будуть перевіряти людини. Орієнтовна ціна і терміни виконання тестів наступна:

1. ІПСШ перевірять за 1 день, ціна – 400-500 рублів.
2. Герпес, ВПЛ, вірус Епштейна-Барра, цитомегловирус виявляють за добу, ціна – 300-500 р.
3. Аналіз на гепатит проводиться за 5 днів, ціна на якісний варіант – 500 р., кількісний – 2000 р.
4. Хелікобактер пілорі виявляють за добу, ціна – 400 р.
5. Антигени, антитіла ВІЛ, ціна – від 380 р.
6. Якісний аналіз РНК ВІЛ, ціна – від 3 500 р.
7. Кількісний аналіз РНК ВІЛ, ціна – від 11 000 грн.

Відео

ПЛР(полімеразна ланцюгова реакція)